液相色譜柱簡介和柱長及內(nèi)徑的選擇

　　色譜是一種分離分析手段，分離是核心，因此擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟，對色譜柱的要求是柱效高，選擇性好，分析速度快等，市售的用于HPLC的各種微粒填料好多孔硅膠以及以硅膠為基質(zhì)的鍵合相，氧化鋁，有機(jī)聚合物微球（包括離子交換樹脂），多孔碳等，其粒度一般為3，5，7，10um等，柱效理論值可達(dá)5～16萬／米。

　　對于一般的分析只需5000塔板數(shù)的柱效，對于同系物分析，只要500即可，對于較難的分離物質(zhì)對則可采用高達(dá)2萬的柱子，因此一般色譜柱10～30cm左右的柱長就能滿足復(fù)雜混合物分析的需要。

　　柱效受柱內(nèi)外因素影響，為使色譜柱達(dá)到最佳效率，除柱外死體積要小外，也要有合理的柱結(jié)構(gòu)（盡可能減少填充床以外的死體積）及裝填技術(shù)。

　　即使最好的裝填技術(shù)，在柱中心部位和沿管壁部位的填充情況總是不一樣的，靠近管壁的部位比較疏松，易產(chǎn)生溝流，流速較快，影響沖洗劑的流形，使譜帶加寬，這就是管壁效應(yīng)，這種管壁區(qū)大約是從管壁向內(nèi)算起30倍料徑的厚度，在一般的液相色譜系統(tǒng)中，柱外效應(yīng)對柱效的影響色譜柱遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于管壁效應(yīng)。

　　柱長及內(nèi)徑的選擇：。

　　長度的選擇：柱越長，總柱效越高(n值越大)，柱越長，分析時間也越長，250—300mm是最普遍的柱長，實(shí)驗(yàn)室一半以上的工作都是采用此規(guī)格柱子，一般用來分離l0到50個組份的中等至復(fù)雜混合物，500—600mm，要求較高分辨率的應(yīng)用，—般用來分離大于50個組份或包含有難分離物質(zhì)的復(fù)雜樣品程序升溫分析。

　　內(nèi)徑：柱效率與柱半徑平方成反比，內(nèi)徑越小柱效越高，但內(nèi)徑越大，柱容量也增加，允許進(jìn)樣量就越多，色譜柱當(dāng)進(jìn)樣量超過柱容量時，則因柱內(nèi)每塊理論板內(nèi)不能建立真正的平衡，將會導(dǎo)致色譜蜂畸變，柱分辨率降低，重現(xiàn)性不好，因此對于復(fù)雜樣品需要精確分離，必須使用小內(nèi)徑柱子，另一方面若樣品中存在具有很不相同濃度組份化合物，為了增加樣品容量就必須使用內(nèi)徑大的柱子，目前實(shí)驗(yàn)室使用最常見的柱子內(nèi)徑一般是4.6mm。

　　一般選擇原則：分析大分子量化合物選擇大孔徑色譜柱，對于高pH值或者堿性化合物需要選擇高封端或者特殊封端的色譜柱，以改善峰形，延長色譜柱使用壽命等。

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