色譜柱什么時(shí)候該換新柱？判斷依據(jù)是什么？

色譜工作者經(jīng)常遇到這樣的問(wèn)題。什么時(shí)候換色譜柱？色譜柱的塔板數(shù)量能反映色譜柱的狀態(tài)嗎？確定一個(gè)色譜柱應(yīng)該是“退休”標(biāo)準(zhǔn)，從經(jīng)驗(yàn)來(lái)看，當(dāng)色譜柱的塔板數(shù)量降低到新柱的百分比時(shí)，就會(huì)覺(jué)得色譜柱不能再使用了？如何判斷你的實(shí)驗(yàn)室里的色譜柱能不能再使用？判斷依據(jù)應(yīng)該是什么？

我相信每個(gè)色譜工作者都會(huì)關(guān)注分辨率。分辨率是檢查色譜柱分離特定樣品質(zhì)量的水平指標(biāo)。色譜的核心任務(wù)是使每個(gè)峰完成分離。我們需要在日常工作中獲得合理的峰寬窄峰，以獲得較低的檢測(cè)限制（這不再是問(wèn)題，現(xiàn)在色譜柱可以滿足這一要求）。

更好的方法是利用壓力、分辨率和峰值混合指標(biāo)來(lái)檢查色譜柱的狀態(tài)。測(cè)量壓力是最容易的。一般來(lái)說(shuō)，我們確定的色譜方法應(yīng)滿足以下要求：使用新柱時(shí)，柱壓不應(yīng)高于2500psi，在任何情況下，壓力都不超過(guò)30000psi。雖然現(xiàn)代液相色譜系統(tǒng)可以在更高的壓力下使用，但由于高壓而產(chǎn)生的系統(tǒng)消耗和泄漏問(wèn)題將非常嚴(yán)重。當(dāng)壓力超過(guò)3萬(wàn)時(shí)psi考慮更換進(jìn)樣器和色譜柱之間的0.5mm孔徑在線濾芯。如果更換濾芯后壓力仍然很高，色譜柱的濾芯或色譜柱就會(huì)被污染，這提醒我們更換柱子。據(jù)統(tǒng)計(jì)，超過(guò)60%的色譜柱因壓力過(guò)大而損壞。

分辨率是我們調(diào)查色譜柱的一個(gè)至關(guān)重要的指標(biāo)。只要兩種成分能得到基線分離，分析物的定量就不會(huì)有問(wèn)題。對(duì)于對(duì)稱的高斯峰，1.5分辨率即可獲得基線分離；若分辨率為5；Rs在1.7至2.0之間更好。如果峰尾嚴(yán)重，則需要更高的分辨率。使用分辨率作為色譜柱評(píng)價(jià)指標(biāo)的優(yōu)點(diǎn)是我們可以直觀地看到相鄰峰的分離。

調(diào)查色譜柱質(zhì)量的另一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)是峰形拖尾狀態(tài)。制造商檢測(cè)報(bào)告的峰形特別漂亮，但這并不意味著色譜柱分析了實(shí)際樣品的情況。實(shí)際樣品中總是含有或多或少導(dǎo)致峰形拖尾的成分。最值得一提的是含有氮原子的化合物，它們與硅膠框架上分散的硅羥基緊密結(jié)合。色譜柱使用時(shí)間越長(zhǎng)，鍵合相流失，拖尾越嚴(yán)重。然而，拖尾狀態(tài)的變化并不像分辨率的變化那樣立即可見(jiàn)?；诖?，最好設(shè)置一個(gè)拖尾因子的上限。例如，美國(guó)藥典規(guī)定拖尾因子不超過(guò)1.8。

確定色譜柱“拋棄”標(biāo)準(zhǔn)的最佳時(shí)間是當(dāng)我們開(kāi)發(fā)分析方法或進(jìn)行方法認(rèn)證時(shí)。一般來(lái)說(shuō)，在開(kāi)發(fā)分析方法的過(guò)程中，你會(huì)測(cè)試幾個(gè)色譜柱，分析足夠的實(shí)際樣品，你知道當(dāng)分離下降時(shí)會(huì)發(fā)生什么。我專注于在開(kāi)始時(shí)使用一個(gè)廣泛的類別。我們的經(jīng)驗(yàn)是：如果您在開(kāi)始時(shí)收緊系統(tǒng)的適用性要求，則很難在方法認(rèn)證后放寬這一要求。在研究實(shí)際樣品之前進(jìn)行系統(tǒng)適用性調(diào)查，以確保色譜符合分析師可接受的標(biāo)準(zhǔn)。