反相色譜柱的影響因素有哪些？

根據(jù)其色譜分離模式，液相色譜柱大致可分為正相、反相、離子交換、疏水、體積排除、親和力和手性。反相色譜柱是以非極性基團(tuán)載體為填料的色譜柱。

反相柱填料主要以硅膠為基質(zhì)，表面鍵合非極性十八烷基官能團(tuán)(ODS)稱為C18柱、其他常用的反相柱還有C8,C4,C2、苯基柱等。還有離子交換柱，GPC柱、聚合物填料柱等。

反相色譜柱的影響因素：

1.柱長

隨著柱長的增加，有機(jī)小分子和肽的分辨率增加.但柱長的增加并不能顯著提高蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子的分辨率.它們通常在較短的柱子上有很好的分離效果。

2.流動相的流速。

有機(jī)小分子和肽的分辨率對流動相流速非常敏感。蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子的分辨率不是。流量越小，柱子越長，色譜峰的寬度越大，分辨率越小。色譜上樣過程中的流量對動態(tài)吸附容量有很大的影響。

3.溫度。

隨著溫度的升高，流動相粘度降低，流動速度加快，流動相與固定相之間的傳質(zhì)速度加快，分辨率增加。同時，隨著溫度的升高，分子熱運動增加，疏水效果減弱。提高溫度時，應(yīng)考慮目標(biāo)物質(zhì)的熱穩(wěn)定性。

4.流動相。

流動相大，溶質(zhì)分布系數(shù)越大，洗脫時間越短。RPC采用線性梯度洗脫法，降低流動相極性（含水量）。水是極性的。zui強溶劑通常與反相色譜中的基本溶劑一起使用。在流動相中加入不同濃度的有機(jī)溶劑可與水混合，以獲得不同強度的流動相。這些有機(jī)溶劑被稱為修飾劑。反相色譜zui常用的有機(jī)溶劑有甲醇和乙腈。此外，乙醇、四氫呋喃、異丙醇和二氧六環(huán)也常被用作修飾劑。有機(jī)溶劑的梯度也會影響分辨率，梯度越小.分辨率越大。