微生物菌種如何分離純化？

　　【方法】從成都熱電廠采集土樣中分離得到一株微生物菌種,分析該菌株的形態(tài)學特征、培養(yǎng)特征及16S rDNA序列,確定菌株的分類地位。利用Design-Expert軟件中的Box-Behnken法設計實驗,通過響應面分析對初始pH值、溫度、接種量和裝液量4個因素進行優(yōu)化,確定其最適培養(yǎng)條件。

　　【結果】獲得菌株Z1,該菌為革蘭氏陰性菌,短桿狀,經16S rDNA鑒定為嗜酸性氧化亞鐵硫桿菌(Acidithiobacillus ferrooxidans,簡稱At.f)。確定菌株zui適培養(yǎng)條件為:pH 1.8、溫度30°C、接種量14%、裝液量250 mL搖瓶裝60 mL培養(yǎng)液。在此條件下,Z1的亞鐵氧化率可達99.7%。

　　【結論】Z1菌株適合于生物浸礦的應用。

　　1947年,Colmer和Hinkle從礦山酸性廢水中分離出一株嗜酸桿菌命名為氧化亞鐵硫桿菌(Thiobacillus ferrooxidans,簡稱T.f),并證明該菌能促進煤中黃天礦的氧化和溶解,這被認為是微生物冶金研究的開端。

　　T.f屬于革蘭氏陰性菌,具有專性好氧、嗜酸、化能自養(yǎng)等特點,該菌通過氧化亞鐵離子為三價鐵離子或氧化還原態(tài)硫化物為硫酸根而獲得生長和生命活動的能量,在生物脫硫、生物冶金、生物處理污泥中的重金屬和有色金屬回收等領域都具有一定的應用價值。隨著生物技術的快速發(fā)展,微生物的鑒定手段被大大豐富,尤其是分子生物學技術的發(fā)展,使微生物的分類和鑒定結果更為快捷、準確。

　　Peng H.從不同的礦井水中分離出4株不同的氧化亞鐵硫桿菌,應用16S rDNA序列分析法進行了分類和鑒定?？蒲腥藛T用單因素或正交實驗對氧化亞鐵硫桿菌的培養(yǎng)條件進行了研究。

　　響應面分析法是分析響應變量η與一組輸入變量(ζ1,ζ2,ζ3...ζk)之間的函數關系[η=f(ζ1,ζ2,ζ3...ζk)],也是一種實驗條件尋優(yōu)的方法,微生物菌種適合于解決非線性數據處理的相關問題。與以往的單因素或正交實驗相比,其優(yōu)點在于不僅能確定單因素對菌株活性的影響,而且能分析各個因素間交互作用的大小,同時通過回歸模型可以分析出影響菌株活性的主要因素。