制備柱分離步驟和選擇指南

　　制備柱分離步驟和選擇指南。制備柱就是高效液相色譜是一種分析方法，制備色譜是一種分離純化手段。高效液相色譜把普通的色譜柱換成制備柱，就是制備液相色譜，兩者的區(qū)別在于一種以分析為目的，追求的是檢測精度，樣品承載量非常小；接下來就來看看制備柱分離步驟和選擇指南。

　　一、制備柱分離步驟

　　1、考慮到填料由分析級直接放大到制備級的因素，如果要純化大量的化合物，需要考慮分析柱的規(guī)格和可作為制備柱的填料粒徑(10μm或更大)；作為在下一步純化產(chǎn)品量更大的項目，必須考慮選擇更大的填料粒徑和更大內(nèi)徑的色譜柱，在與分析柱相同的填料下對產(chǎn)品進行純化。

　　2、對分析柱(4.6mm內(nèi)徑或更小)選擇性的研究，應(yīng)在多種填料和多種色譜條件下進行選擇，可以采用一些商品的液相色譜條件選擇軟件進行多種色譜模式的比較選擇，這樣可以縮短分離條件選擇的時間。

　　3、在得到最佳的分離條件后，需要對分析柱上樣品的承載量進行測試，比較多種上樣量下產(chǎn)物的純度，選擇最理想產(chǎn)物純度的最大上樣量。

　　4、選擇制備柱的規(guī)格，要依據(jù)在分析柱上得到的上樣量數(shù)據(jù)，進行放大分離，通常選擇與分析柱相同粒徑的填料和色譜柱長度來達到推測制備分離的預(yù)測。放大制備柱的上樣量應(yīng)基于制備柱和分析柱的交叉截面面積的比值來進行選擇。

　　二、制備柱的選擇指南

　　第一步：選擇合適的填料

　　越小的粒徑具有越高的柱效，但是價格更高，并且?guī)砀叩闹鶋?，要求設(shè)備的硬件具備更高的壓力耐受性。在被測組分的色譜峰與其它色譜峰非?？拷鼤r，就需要更高的柱效，此時較小粒徑的色譜填料就顯得非常有用。相反，越大的粒徑則柱效越低，但價格也相對較低,同時對設(shè)備的要求也不高(10um最常用)。

　　第二步：針對蛋白質(zhì)、多肽類等物質(zhì)，選擇合適的鍵合相、孔徑。

　　由目前市場需求來看，蛋白質(zhì)、多肽等類的物質(zhì)分離純化十分普遍，其中以C18、C8、C4的鍵合相居多，如何根據(jù)物質(zhì)分子量的大小，來選擇合適的含碳量和粒徑是個非常重要的問題。而相同粒徑不同孔徑的效果也有不同，如120A、300A等，因此，孔徑的選擇也十分重要。

　　第三步：選擇合適的柱管。

　　樣品的上樣要與色譜柱的交叉截面面積相對稱，要選擇色譜柱的內(nèi)徑要適合于樣品的上樣量（21.2最常用）。越長的色譜柱具有越高的柱效和更高的樣品承載量，但是柱壓將會更高，同時分離時間可能會更長（250mm最常用）。

　　以上就是制備柱分離步驟和選擇指南，當(dāng)然制備柱還有更多的操作步驟和知識，這邊只是說了一小部分，可以致電研創(chuàng)生物進行咨詢了解。